ADPG焦磷酸化酶（AGP）測試盒

ADPG焦磷酸化酶（AGP)測試盒 微量法
貨號：BC0435
規格：100T/96S

產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 6.4mL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑三：粉劑×2 瓶，4℃保存；臨用前加入 2mL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃
保存；
試劑四：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前每支加入 500μL 雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑五：液體 250μL×2 支，-20℃保存。

產品說明：
    AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與 ATP 反應生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
    AGP 催化的逆向反應生成 G1P，在反應體系中添加的磷酸己糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下測定 NADPH 增加速率，即可計算 AGP 活性。

需自備儀器跟用品
    紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：
一、 粗酶液制備
稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
二、 測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長 340nm，蒸餾水調零。
2、在 EP 管中按順序加入下列試劑（如果一次性測定樣本較多，可以將試劑一、二按比例配成混合液 1，將試劑一、三、四和五按比例配成混合液 2）
試劑名稱（μL）  測定管
試劑一  40
試劑二  64
樣本  8

混勻，30℃保溫 15 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴
迅速冷卻后加入下列試劑（試劑一、試劑三置 37℃保溫 10min 以上。）
試劑一  120
試劑三  40
試劑四  8
試劑五  4
混勻后立即在 340nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計算 ΔA=A2-A1。
三、AGP  活性 計算
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性
單位。
AGP 活性（U/mg prot）＝ΔA÷ε÷d×V 反總÷T÷（Cpr×V 樣本）=2854×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測定粗酶液蛋白質濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
AGP 活性（U/g 鮮重）＝ΔA÷ε÷d×V 反總÷T÷（W×V 樣本÷V 提?。?2854×ΔA÷W。
T：反應時間，2min；ε：NADPH 消光系數，6.22×10 -3 mL ˙ nmol -1 ˙ cm -1 ；V 反總：反應總體積，
0.284mL；d:石英比色皿光程，1cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V 樣本：加入的樣本體積，0.008mL；
V 提?。杭尤氲奶崛∫后w積，1mL；W：樣本鮮重，g。
b. 使用 96  孔板測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性
單位。
AGP 活性（U/mg prot）＝ΔA÷ε÷d×V 反總÷T÷（Cpr×V 樣本）=4756×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測定粗酶液蛋白質濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
AGP 活性（U/g 鮮重）＝ΔA÷ε÷d×V 反總÷T÷（W×V 樣本÷V 提?。?4756×ΔA÷W。
T：反應時間，2min；ε：NADPH 消光系數，6.22×10 -3 mL ˙ nmol -1 ˙ cm -1 ；V 反總：反應總體積，
0.284mL；d:96 孔板光程，0.6cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V 樣本：加入的樣本體積，0.008mL；
V 提?。杭尤氲奶崛∫后w積，1mL；W：樣本鮮重，g。

ADPG焦磷酸化酶（AGP)測試盒 微量法訂購說明：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

ADPG焦磷酸化酶（AGP)測試盒 微量法運輸說明：

極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。